|
Изучение
безопасности и определение аллергенных и иммунотоксических свойств
"Эксолина"®
"Эксолин"® относится к группе белковых экстрактов, источником
которого является однородно-измельченная мясокостная масса птиц.
"Эксолин"® приготавливают методом экстракции в 0,1 М
уксусной кислоте. Для изучения "Эксолина"® на животных
был взят гель "Эксолина"® 3,5% в дозах из расчета по
сухому веществу: терапевтическая - 85 мг/кг и увеличенная в 300
раз - 25,5 г/кг. Препаратом сравнения был взят 2% раствор коллагена
ФС 42-2670-89, произведенный в г. Луга методом щелочно-солевой
экстракции гольего спилка дермы крупного рогатого скота.
Исследования проводили
согласно общепринятой программе исследования безопасности лекарственных
средств: Методические рекомендации по оценке аллергенных свойств
фармакологических средств. М., 1988; Методические рекомендации
по оценке доклинической безопасности фармакологических средств.
М., 1992; Методические рекомендации по оценке иммунотоксических
свойств фармакологических средств. М., 1992. Исследования проводились
на базе Межотраслевого научно-технического комплекса "Микрохирургия
глаза" ООО "Научно-экспериментальное производство Микрохирургия
глаза".
1. Изучение острой
токсичности проводили на нелинейных мышах введением препарата
внутрибрюшинно в терапевтичесой дозе и в дозе, превышающей терапевтическую
в 300 раз. Контролем служила интактная группа животных. Наблюдение
вели в течение 1 недели.
В результате исследований
было установлено, что в течение наблюдаемого времени среди подопытных
животных их гибели не наблюдалось. Макроскопические и микроскопические
исследования внутренних органов после вскрытия животных у опытных
и контрольных групп не выявили отличий.
2. Изучение субхронической
токсичности проводили внутрижелудочным и ректальным введением
препарата на нелинейных крысах. "Эксолин"® вводили внутрижелудочно
через зонд в терапевтической дозе и в дозе, превышающей терапевтическую
в 300 раз. Контрольной группе вводили препарат сравнения - фармакопейный
коллаген, произведенный в г. Луга, в терапевтической дозе. Еще
один контроль составляла группа интактных животных. Схема введения:
10 дней ежедневно, на 11 день произведен забой методом декапитации.
Ректальное введение
"Эксолина"® осуществляли внутрь прямой кишки через канюлю
в тех же дозах. Схема введения и подбор опытных и контрольных
групп аналогичны.
В результате исследований
было установлено, что в течение наблюдаемого периода времени гибели
животных не наблюдалось; не наблюдалось также изменений в поведение,
в двигательной активности и внешнем виде животных.
Гематологические исследования
не выявили различий в показателях крови подопытных и контрольных
групп (Таблица 1). Биохимические исследования показали, что все
исследованные показатели находились в пределах физиологических
колебаний (Таблица 2).
Патоморфологические
исследования внутренних органов животных после вскрытия не выявили
каких либо отклонений.
Таким образом, внутрижелудочное
и ректальное введение "Эксолина"® в терапевтической
дозе и в дозах, превышающих терапевтическую в 300 раз, не вызывают
нарушений внутренних органов крыс и не оказывают раздражающего
действия на слизистую оболочку прямой кишки.
При гистологическом
исследовании желудочно-кишечного тракта, включая прямую кишку,
следов экспериментального воздействия не обнаружено, что говорит
о том, что местнораздаржающее действие у "Эксолина"®
отсутствует.
Таблица 1. Показатели
периферической крови животных при внутрижелудочном введении Эксолина.
| Показатели |
Контрольная группа |
"Эксолин"®; терапевт.
доза |
"Эксолин"®; доза
300х |
Коллаген г.Луга
терапевт. доза |
| Эритроциты (млн.) |
7.1
(6.1-8.1) |
6.6
(6.0-7.2) |
6.5
(6.0-7.0) |
6.6
(6.0-7.2) |
| Лейкоциты (тыс.) |
7.8
(7.2-8.4) |
8.0
(6.5-9.5) |
10.4
(3.3-17.5) |
8.6
(6.0-11.2) |
| Нейтрофилы, % |
28.6
(21.5-35.7) |
26.6
(20.6-32.6) |
29.4
(27.0-31.8) |
26.6
(20.6-32.6) |
| Базофилы, % |
|
|
|
|
| Эозинофилы, % |
4.6
(1.6-7.6) |
4.2
(1.8-6.6) |
4.4
(2.6-6.2) |
3.6
(1.8-5.4) |
| Моноциты, % |
0.8
(0.2-1.4) |
0.8
(0.2-1.4) |
0.6 |
1.0
(0.4-1.6) |
| Тромбоциты (тыс.) |
863.8
(812.6-915.0) |
847.8
(805.5-890.1) |
836.4
(787.0-885.8) |
848.4
(787.6-909.2) |
| Гемоглобин |
16.4
(15.2-17.6) |
16.0
(14.2-17.8) |
16.2
(14.4-18.0) |
16.0
(14.8-17.2) |
| Гематокрит |
51.4
(47.8-55.0) |
51.0
(49.2-52.8) |
50.4
(48.6-52.2) |
51.4
(49.6-53.2) |
Таблица 2. Биохимические
показатели крови животных при внутрижелудочном введении Эксолина.
| Показатели |
Контрольная группа |
"Эксолин"®; терапевт.
доза |
"Эксолин"®; доза
300х |
Коллаген г.Луга
терапевт. доза |
| Глюкоза, мг% |
77
(55-99) |
81
(62-100) |
94
(84-104) |
71
() |
| Аланиновая аминотранс-фераза,
усл.ед. |
34
(29-39) |
36
(31-41) |
31
(29-33) |
32
(28-36) |
| Аспарагиновая
аминотранс-фераза, усл.ед. |
28.6
(21.5-35.7) |
26.6
(20.6-32.6) |
29.4
(27.0-31.8) |
26.6
(20.6-32.6) |
| Щелочная фосфотаза,
мккат/л |
8.8
(6.1-11.5) |
7.4
(5.6-9.2) |
8.9
(5.9-11.9) |
8.2
(6.7-9.7) |
| Общий белок,
г/л |
79
(60-98) |
86
(81-91) |
79
(60-98) |
78
(61-95) |
| Альбумин, г/л |
39
(37-41) |
37
(35-39) |
38
(37-39) |
36
(35-37) |
| Холестерин, ммоль/л |
2.6
(1.5-3.7) |
3.2
(2.7-3.7) |
2.1
(1.6-2.6) |
2.4
(1.9-2.9) |
| Мочевина |
8.5
(5.3-11.7) |
8.3
(7.5-9.1) |
6.9
(5.3-8.5) |
7.5
(6.0-9.0 ) |
3. Изучение гиперчувствительности
немедленного типа проводили на кроликах породы Шиншилла, полученных
из питомника АМН РФ. Исследование проводили методом закапывания
препаратов в конъюктиву глаза: "Эксолина"®; в терапевтической
дозе и 0,1 М уксусной кислоты (растворитель). Клинические наблюдения
проводили методом биомикроскопии через 15 минут после введения
и ежедневно в течение недели. Отмечено возникновение незначительного
отека конъюктивы на третье закапывание в обоих группах кроликов:
при закапывании "Эксолина"®; в терапевтической дозе и при закапывании
растворителя (0,1 М уксусной кислоты). Отек исчезал на следующий
день. Реакция на закапывание соответствовала раздражающему эффекту
1-2 степени и не являлась аллергической реакцией.
4. Изучение активной
кожной анафилаксии осуществляли на морских свинках по стандартной
методике. Было показано, "Эксолин"®; в терапевтической дозе не
вызывает аллергической реакции, тогда как при исследовании препарата
сравнения - фармакопейного коллагена (г.Луга), и "Эксолина"®;
в дозе, превышающей терапевтическую в 300 раз, была отмечена положительная
реакция.
5. Изучение гиперчувствительности
замедленного типа не выявило сенсибилизирующих свойств "Эксолина"®;
как в терапевтической дозе, так и в дозе, превышающей терапевтическую
в 300 раз. Введение "Эксолина"®; не вызывает реакции гиперчувствительности
замедленного типа.
6. Изучение "Эксолина"®;
в реакции дегрануляции тучных клеток, осуществленное по
стандартной методике на крысах, показало, что процент дегрануляции
тучных клеток в группах с введением "Эксолина"®; и препарата сравнения
в терапевтических дозах не превысил порогового значения 5%. Реакция
на введение "Эксолина"®; в дозе, превышающей терапевтическую в
300 раз, оказалась слабо положительной (Таблица 3).
Таблица 3. Определение
дегрануляции тучных клеток.
| Контрольная группа |
"Эксолин"®; терапевт.
доза |
"Эксолин"®; доза
300х |
Коллаген г.Луга
терапевт. доза |
| 4 |
12 |
5 |
2 |
| |
|
Реакция
слабо положительная |
|
7. Определение фагоцитарной
активности макрофагов осуществляли методом, основанным на
определении оптической плотности лизирующего раствора после разрушения
фагоцитов, поглотивших частицы нейтрального красного. Крыс, подвергнутых
воздействию исследуемых препаратов, забивали путем дислокации
шейных позвонков. Асептически освобождали брюшину и внутрибрюшинно
вводили 5 мл среды 199, содержащей 20% эмбриональной телячьей
сыворотки. После массажа брюшной полости среду отсасывали шприцом.
Порции клеточной суспензии, полученные от всей группы животных,
объединяли в общий пул. Концентрацию живых клеток доводили до
1,5х106 клеток/мл. Суспензию клеток стерильно разливали по 2 мл
в пластиковые чашки Петри диаметром 40 мм. Чашки инкубировали
2 часа при 37oС. Надосадок, содержащий неприлипшие
клетки, сливали, а фиксированный на пластинке монослой дважды
промывали средой 199. В слегка подсушенные чашки наливали раствор
А, содержащий нейтральный красный, и выдерживали при 37oС
в течение 1 часа. Раствор сливали, клетки промывали средой 199.
В каждую чашку вносили по 3 мл лизирующего раствора Б. Клетки
тщательно обрабатывали вращательным движением чашки. Раствор сливали
в пробирки, и на спектрофотометре при длине волны 540 нм измеряли
оптическую плотность.
Было установлено,
что при введении "Эксолина"®; фагоцитарная активность макрофагов
не снижается. Статистически достоверных различий между показателями
в опытных и контрольной группах нет.
Выводы
"Эксолин"® в терапевтической
дозе (85 мг сухого вещества/кг) производства фирмы ЛитА-Цвет не
обладает острой токсичностью, не раздражает органы брюшины при
внутрибрюшинном введении, не обладает субхронической токсичностью,
не иммунотоксичен, не проявляет кожной анафилаксии, не проявляет
гиперчувствительности замедленного типа.
В дозе, превышающей
терапевтическую в 300 раз (25,5 г сухого вещества/кг), "Эксолин"®;
в отдельных случаях проявляет активную кожную анафилаксию, гиперчувствительности
замедленного типа не обнаружено, при субхронических исследованиях
выявлены единичные поражения печени.
Таким образом, "Эксолин"®;
производства фирмы ЛитА-Цвет рекомендуется к испытаниям в клинике.
_______________________
Наверх
|